Beschreibung des Produkts
Rekombinantes Aleuria aurantia Lektin wird in E.coli hergestellt und hat eine Aminosäuresequenz, die mit dem nativen Aleuria aurantia Lektin identisch ist. AAL ist ein dimeres Lektin mit zwei identischen Untereinheiten von etwa 36 kDa. Jede Untereinheit hat fünf Kohlenhydrat-Bindungsstellen (1). Das Lektin erkennt und bindet spezifisch an Fucose und terminale Fucosereste auf komplexen Oligosacchariden und Glykokonjugaten. rAAL hat eine Bindungsaffinität für Fucose in allen Bindungspositionen (α1-2, α1-3, α1-4 und α1-6), und im Gegensatz zu aus natürlichen Quellen gereinigtem AAL ist rAAL nicht mit freier Fucose verunreinigt, was zu einer höheren Affinität gegenüber fucosylierten Oligosacchariden führt als natives AAL (2).
Rekombinantes AAL hämagglutiniert Erythrozyten unabhängig von der Blutgruppe (A, B und 0) in denselben Titern wie aus natürlichen Quellen isoliertes AAL.
AAL wird häufig für die Analyse und Aufbereitung von Oligosacchariden und Glykoproteinen verwendet (3). Zu den diagnostischen Anwendungen gehört die Analyse der krankheitsbedingten Glykosylierung von Plasmaproteinen (4). Darüber hinaus kann rAAL immobilisiert und für die Affinitätschromatographie verwendet werden (5).
Anwendungen
- Untersuchungen von Glykoproteinen und Glykolipiden
- Reinigung von Membranproteinen
- Affinitätschromatographie
- Studien zur Agglutination
Gebrauchsanweisung
Das Lektin kann mit 10 mM HEPES, 0,15 M NaCl, pH 7,5, 0,08 % Natriumazid, 0,1 mM Ca++, 0,01 mM Mn++ rekonstituiert werden. Drehen Sie das Fläschchen vorsichtig, bis es sich vollständig aufgelöst hat. Es wird angenommen, dass die Aggregation in Gegenwart hoher Konzentrationen von 2-Mercaptoethanol auftritt.
Versand und Lagerung
Das Produkt wird bei -20°C versandt, kann jedoch für den Transport im Laufe des Tages auch bei Raumtemperatur versandt werden. Das gefriergetrocknete Pulver ist ab dem Herstellungsdatum mehr als drei Jahre lang stabil, wenn es unter -20°C gelagert wird. Nach der Rekonstitution mit HEPES-Puffer kann die Lösung in Arbeitsaliquots bis zu 12 Monate lang gefroren gelagert werden.
Referenzen
(1) Wimmerova M, Mitchell E, Sanchez JF, Gautier C, Imberty A. Crystal structure of fungal lectin: six-bladed beta-propeller fold and novel fucose recognition mode for Aleuria aurantia lectin. J Biol Chem. 2003; 278:27059-67.
(2) Olausson J, Tibell L, Jonsson BH, Påhlsson P. Detection of a high affinity binding site in recombinant Aleuria aurantia lectin.Glycoconj J. 2008; 25:753-62.
(3) Yazawa S, Kochibe N, Asao T. A simple procedure for isolation of tumor-associated antigens by affinity chromatography using fucose-specific Aleuria aurantia lectin. Immunol Invest. 1990; 19:319-27.
(4) Hashimoto S, Asao T, Takahashi J, Yagihashi Y, Nishimura T, Saniabadi AR, Poland DC, van Dijk W, Kuwano H, Kochibe N, Yazawa S. alpha1-acid glycoprotein fucosylation as a marker of carcinoma progression and prognosis. Cancer. 2004; 101:2825-36.
(5) Bergström M, Aström E, Påhlsson P, Ohlson S. Elucidating the selectivity of recombinant forms of Aleuria aurantia lectin using weak affinity chromatography. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2011 [Epub ahead of print]
