Produktbeskrivning
Rekombinant Aleuria aurantia lektin produceras i E.coli och har en aminosyrasekvens som är identisk med ursprunglig Aleuria aurantia lektin. AAL är ett dimeriskt lektin med två identiska subenheter på cirka 36 kDa. Varje subenhet har fem kolhydratbindande platser (1). Lektinet känner igen och binder specifikt till fucose och terminala fucose-rester på komplexa oligosackarider och glykokonjugat. rAAL har bindningsaffinitet för fucose i alla bindningspositioner (α1-2, α1-3, α1-4 och α1-6) och i motsats till AAL renat från naturliga källor är rAAL inte förorenat med fri fucose vilket ger högre affinitet mot fucosylerade oligosackarider än nativt AAL (2).
Rekombinant AAL hemagglutinerar erytrocyter oavsett blodgrupp (A, B och 0) i samma titrar som AAL isolerat från naturliga källor.
AAL har använts i stor utsträckning för analys och beredning av oligosackarider och glykoproteiner (3). Diagnostiska tillämpningar inkluderar analys av sjukdomsassocierad glykosylering på plasmaproteiner (4). Dessutom kan rAAL immobiliseras och användas för affinitetskromatografi (5).
Tillämpningar
- Studier av glykoproteiner och glykolipider
- Rening av membranproteiner
- Affinitetskromatografi
- Agglutinationsstudier
Anvisningar för användning
Lektinet kan rekonstitueras med 10 mM HEPES, 0,15 M NaCl, pH 7,5, 0,08 % natriumazid, 0,1 mM Ca++, 0,01 mM Mn++. Snurra flaskan försiktigt tills den är helt upplöst. Aggregation tros uppstå i närvaro av höga koncentrationer av 2-merkaptoetanol.
Frakt och lagring
Produkten levereras vid -20°C, men för transport under dagen kan den levereras vid rumstemperatur. Det frystorkade pulvret är stabilt i mer än tre år från produktionsdatum vid förvaring under -20°C. Efter rekonstituering med HEPES-buffert kan lösningen förvaras fryst i fungerande alikvoter i upp till 12 månader.
Referenser
(1) Wimmerova M, Mitchell E, Sanchez JF, Gautier C, Imberty A. Crystal structure of fungal lectin: six-bladed beta-propeller fold and novel fucose recognition mode for Aleuria aurantia lectin. J Biol Chem. 2003; 278:27059-67.
(2) Olausson J, Tibell L, Jonsson BH, Påhlsson P. Detection of a high affinity binding site in recombinant Aleuria aurantia lectin.Glycoconj J. 2008; 25:753-62.
(3) Yazawa S, Kochibe N, Asao T. A simple procedure for isolation of tumor-associated antigens by affinity chromatography using fucose-specific Aleuria aurantia lectin. Immunol Invest. 1990; 19:319-27.
(4) Hashimoto S, Asao T, Takahashi J, Yagihashi Y, Nishimura T, Saniabadi AR, Poland DC, van Dijk W, Kuwano H, Kochibe N, Yazawa S. alpha1-acid glycoprotein fucosylation as a marker of carcinoma progression and prognosis. Cancer. 2004; 101:2825-36.
(5) Bergström M, Aström E, Påhlsson P, Ohlson S. Elucidating the selectivity of recombinant forms of Aleuria aurantia lectin using weak affinity chromatography. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2011 [Epub före utskrift].
