Eigenschaften
- Hochreine Qualität
- Zuckerspezifität: α-Man, α-Glc
- Mitogen, das hauptsächlich auf T-Lymphozyten wirkt
- Reagiert mit einer Reihe von Bakterien- und Tierzellen
- Agglutiniert mit Neuraminidase behandelte Erythrozyten
Beschreibung des Produkts
Concanavalin A (Con A) Lektin wird aus Jackbohnen (Canavalia ensiformis) isoliert und durch Affinitätschromatographie gereinigt. Das Molekulargewicht des Lektins beträgt 104 kDa. Es ist vielseitig einsetzbar und das am häufigsten verwendete Lektin in der molekularbiologischen Forschung.
Con A bindet spezifisch an α-Mannose- und α-Galactose-Strukturen, die in Zuckern, Glykoproteinen und Glykolipiden vorkommen (2). Das Lektin wurde in Hormonrezeptorstudien, mitogenen Assays und zur Charakterisierung normaler und maligner Zellen verwendet (Krebszellen werden leicht durch Con A aggregiert, normale Zellen hingegen nicht). Con A kann auch die Zellteilung (Mitogenese) initiieren, wobei es hauptsächlich auf T-Lymphozyten wirkt (3).
Immobilisiertes Con A wurde bei der Affinitätschromatographie-Reinigung einer Vielzahl von Glykoproteinen und Zellstrukturen eingesetzt.
Die Polyacrylamid-Gelelektrophorese in SDS von Con A aus Jackbohnen ergibt drei Hauptbanden, die den Molekulargewichten 27, 13 und 10 kDa entsprechen. Eine Nebenbande ist bei 18 kDa sichtbar. (4).
Medicago's Con A wird als weißes lyophilisiertes Pulver aus einem Puffer mit 0,5 mMMnCl2, 0,5 mMCaCl2 geliefert, ohne Zusatz von Konservierungsstoffen. Die Identität wird durch SDS-PAGE (Abbildung 1) und der Proteingehalt durch Spektralphotometrie (Abbildung 2) bestimmt. Das Lektin ist in Fläschchen mit 250 mg oder 100 mg lyophilisiertem Pulver erhältlich und das Produkt ist nur für Laborarbeiten bestimmt.
Anwendungen
- Hormonrezeptorstudien
- Mitogene Untersuchungen an Lymphozyten
- Charakterisierung bestimmter normaler und bösartiger Zellen
- Affinitätschromatographie
Gebrauchsanweisung
Das Lektin kann vor Gebrauch mit 2 ml entionisiertem Wasser rekonstituiert werden. Drehen Sie die Durchstechflasche vorsichtig, bis sich das Lektin vollständig aufgelöst hat. Es wird angenommen, dass bei hohen Konzentrationen von 2-Mercaptoethanol eine Aggregation auftritt. Die Lösung kann in diesem Puffer auf die gewünschte Arbeitskonzentration rekonstituiert werden. In Abwesenheit von Laktose polymerisiert das Lektin, und bei einer Lagerung bei einem pH-Wert von 8,6–8,8 kommt es zu einer Ausfällung.
Versand und Lagerung
Das Produkt wird bei -20 °C versandt, kann jedoch für den Transport innerhalb eines Tages bei Raumtemperatur versandt werden. Das lyophilisierte Pulver ist bei Lagerung unter -20 °C ab dem Herstellungsdatum mehr als fünf Jahre haltbar. Nach der Rekonstitution mit entionisiertem Wasser kann die Lösung in Arbeitsaliquoten bis zu 12 Monate lang tiefgefroren gelagert werden.
Referenzen
(1) John L. Wang, Bruce A. Cunningham und Gerald M. Edelman (1971) Ungewöhnliche Fragmente in der Untereinheitsstruktur von Concanavalin A (Gelelektrophorese/Molekulargewichte) Proc. Nat. A cad. Sci. USA Band 68, Nr. 6, S. 1130–1134, JuRm
(2) Ahmed, H.U., Blakeley, M.P., Cianci, M., Cruickshank, D.W.J., Hubbard, J.A., Helliwell, J.R. (2007) Die Bestimmung von Protonierungszuständen in Proteinen. Acta Crystallogr., Sect. D 63: 906.
(3) Liener I. E., Sharon N., Goldstein I. J., (1986) The Lectins - Properties, Functions and Applications in Biology and Medicine.
(4) Krauss S., Buttgereit F., (1999) Auswirkungen des Mitogens Concanavalin A auf die Stoffwechselwege der Thymozyten. BrandBiochim Biophys Acta 1412: 129–38.
