Funktioner
- Ultraren kvalitet
- Sockerspecificitet: α-Man, α-Glc
- Mitogenverkande, främst på T-lymfocyter
- Reagerar med ett antal bakterie- och djurceller
- Agglutinerar neuraminidasbehandlade erytrocyter
Produktbeskrivning
Concanavalin A (Con A)-lektin isoleras från Jack beans (Canavalia ensiformis) och renas med affinitetskromatografi. Lektinets molekylvikt är 104 kDa. Det har breda användningsområden och är det mest använda lektinet inom molekylärbiologisk forskning.
Con A binder specifikt till α-mannos- och α-galaktosstrukturer som finns i sockerarter, glykoproteiner och glykolipider (2). Lektinet har använts i studier av hormonreceptorer, mitogena analyser och för att karakterisera normala och maligna celler (cancerceller aggregeras lätt av Con A medan normala celler inte gör det). Con A kan också initiera celldelning (mitogenes), främst genom att verka på T-lymfocyter (3).
Immobiliserad Con A har använts i affinitetskromatografiska reningar av en mängd olika glykoproteiner och cellulära strukturer.
Polyakrylamidgelelektrofores i SDS av Con A från Jack beans ger tre större band som motsvarar molekylvikterna 27, 13 och 10 kDa. Ett mindre band är synligt vid 18 kDa (4).
Medicagos Con A levereras som ett vitt frystorkat pulver från en buffert innehållande 0,5 mM MnCl2, 0,5 mM CaCl2, inga konserveringsmedel är tillsatta. Identiteten bestäms genom SDS-PAGE (figur 1) och proteininnehållet genom spektrofotometri (figur 2). Lektinet finns i flaskor som innehåller 250 mg eller 100 mg frystorkat pulver och produkten får endast användas för laboratoriearbete.
Tillämpningar
- Studier av hormonreceptorer
- Studier av mitogena lymfocyter
- Karakterisering av vissa normala och maligna celler
- Affinitetskromatografi
Anvisningar för användning
Lektinet kan rekonstitueras med 2 ml avjoniserat vatten före användning. Snurra injektionsflaskan försiktigt tills den är helt upplöst. Aggregation tros uppstå i närvaro av höga koncentrationer av 2-merkaptoetanol. Lösningen kan rekonstitueras i denna buffert till önskad arbetskoncentration. I frånvaro av laktos kommer lektinet att polymeriseras och förvaring vid pH 8,6-8,8 orsakar utfällning.
Frakt och lagring
Produkten levereras vid -20°C, men för transport under dagen kan den levereras vid rumstemperatur. Det frystorkade pulvret är stabilt i mer än fem år från tillverkningsdatum vid förvaring under -20°C. Efter rekonstituering med avjoniserat vatten kan lösningen förvaras fryst i fungerande alikvoter i upp till 12 månader.
Referenser
(1) John L. Wang, Bruce A. Cunningham och Gerald M. Edelman (1971) Unusual Fragments in the Subunit Structure of Concanavalin A (gelelektrofores/molekylvikt) Proc. Nat. A cad. Sci. USA Vol. 68, nr 6, s. 1130-1134, JuRm
(2) Ahmed, H.U., Blakeley, M.P., Cianci, M., Cruickshank, D.W.J., Hubbard, J.A., Helliwell, J.R. (2007) The Determination of Protonation States in Proteins. Acta Crystallogr.,Sect.D 63: 906.
(3) Liener I. E., Sharon N., Goldstein I. J., (1986) The Lectins - Properties, Functions and Applications in Biology and Medicine.
(4) Krauss S., Buttgereit F., (1999) Effekter av mitogenen concanavalin A på vägar för tymocytens energimetabolism. BrandBiochim Biophys Acta 1412: 129-38.
