Beschreibung des Produkts
Lens culinaris Lektinoder Agglutinin (LCA) wird ausLens culinaris (Linsen) Samen isoliert und durch Affinitätschromatographie gereinigt. Das Lektin hat zwei Untereinheiten und ein Molekulargewicht von 46 kDa (1) und bildet zusammen mit Saccharose einen Komplex.
Lektine sind aufgrund ihrer spezifischen Bindung an Kohlenhydratstrukturen auf der Zelloberfläche oder an anderen Stellen in der Hämatologie, Immunologie oder als spezifische Marker für Membranglykoproteinstrukturen nützlich (2). Die Kohlenhydratspezifität von LCA ist D-Mannose und D-Glucose, und die beiden Isomere LCA-A und LCA-B agglutinieren menschliche rote Blutkörperchen, obwohl diese Reaktion nicht blutgruppenspezifisch ist. LCA ist auch ein nützlicher Bestandteil in Affinitätschromatographiesäulen zur Trennung von Glykokonjugaten (3).
Das Lens culinaris-Lektinvon Medicago wird als weißes lyophilisiertes Pulver aus 1 mMCaCl2, 1 mMMnCl2 und 1 mMMgCl2 geliefert. Es sind keine Konservierungsstoffe zugesetzt. Bei der isoelektrischen Fokussierung erzeugt das Lektin zwei Hauptbanden bei pI 8,15 und 8,45 sowie eine Nebenbande bei pI 8,65 (Abbildung 3).Die Aktivität des Lektins wird durch Hämagglutination mit menschlichem Blut bestimmt.Lens culinaris-Lektinagglutiniert eine 2%ige Suspension menschlicher Erythrozyten bei einer Lektinkonzentration von ≤8 μg/ml in 0,9%iger Kochsalzlösung (NaCl) nach 2 Stunden bei 25 °C.
Die Zugabe von 60 mM Methylmannosid führt zu einer Hemmung mit einem Lektin-Titer, der mindestens 16-mal schwächer ist als der der Kontrolle (Abbildung 4). Die Zugabe vonMn2+ undCa2+ zum Rekonstitutionspuffer verstärkt die Hämagglutinationsaktivität (1).
Das Lektin ist in Fläschchen mit 100 mg, 25 mg oder 10 mg lyophilisiertem Pulver erhältlich und das Produkt ist ausschließlich für Laborzwecke bestimmt.
Anwendungen
- Hämagglutinationsstudien
- Zellagglutinationsstudien
- Komponente in Affinitätssäulen
- Trennung von Glykokonjugaten
Gebrauchsanweisung
DasgefriergetrockneteLektinLens culinarisvon Medicago kann vor Gebrauch mit 2 ml entionisiertem Wasser rekonstituiert werden. Drehen Sie das Fläschchen vorsichtig, bis sich das Lektin vollständig aufgelöst hat. Es wird angenommen, dass bei hohen Konzentrationen von 2-Mercaptoethanol eine Aggregation auftritt.
Versand und Lagerung
Das Produkt wird bei -20°C versandt, kann jedoch für den Transport im Laufe des Tages auch bei Raumtemperatur versandt werden. Das gefriergetrocknete Pulver ist ab dem Herstellungsdatum mehr als drei Jahre haltbar, wenn es unter -20°C gelagert wird. Nach der Rekonstitution mit deionisiertem Wasser kann die Lösung in Arbeitsaliquots bis zu 12 Monate eingefroren gelagert werden.
Referenzen
(1) Liener I. E., Sharon N., Goldstein I. J., (1986) Die Lektine – Eigenschaften, Funktionen und Anwendungen in Biologie und Medizin.
(2) Die Struktur des Linsen-Lektins (Lens culinaris) Aminosäuresequenzbestimmung und Vorhersage der Sekundärstruktur. Andre Foriers, Evelyne Lebrun, Roland Van Rapenbusch, Roeland de Neve und A. Donny Strosberg. J. Biol. Chem. 256, Nr. 11: 5550-5560.
(3) NMR-, Molekülmodellierungs- und kristallographische Untersuchungen der Wechselwirkung zwischen Linsenlektin und Saccharose. Casset, F., Hamelryck, T., Loris, R.
