Produktbeskrivning
Lens culinaris lektin eller agglutinin (LCA) isoleras från Lens culinaris (linsfrön) och renas med affinitetskromatografi. Lektinet har två subenheter och en molekylvikt på 46 kDa (1) och det bildar ett komplex tillsammans med sackaros.
Lektiner är på grund av sin specifika bindning till kolhydratstrukturer på cellytan eller på andra ställen användbara inom hematologi, immunologi eller som specifika markörer för membranglykoproteinstrukturer (2). LCA:s kolhydratspecificitet är D-mannos och D-glukos och de två isomererna LCA-A och LCA-B agglutinerar röda blodkroppar från människa, även om denna reaktion inte är blodgruppsspecifik. LCA är också en användbar komponent i affinitetskromatografikolonner för separation av glykokonjugat (3).
Medicagos Lens culinaris-lektin levereras som ett vitt frystorkat pulver från 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2 och 1 mM MgCl2. Inga konserveringsmedel har tillsatts. I isoelektrisk fokusering genererar lektinet två större band vid pI 8,15, 8,45 och ett mindre band vid pI 8,65 (figur 3) Lektinets aktivitet bestäms genom hemagglutination med humant blod. Lens culinaris-lektin agglutinerar en 2% suspension av humana erytrocyter vid en lektinkoncentration på ≤8 μg/ml i 0,9% saltlösning (NaCl) efter 2 timmar vid 25°C.
Tillsats av 60 mM metylmannosid ger en inhibering med en lektintiter som är minst 16 gånger svagare än kontrollen (figur 4). Tillsats av Mn2+ och Ca2+ till rekonstitutionsbufferten ökar hemagglutineringsaktiviteten (1).
Lektinet finns tillgängligt i flaskor innehållande 100 mg, 25 mg eller 10 mg frystorkat pulver och produkten får endast användas för laboratoriearbete.
Tillämpningar
- Studier av hemagglutination
- Studier av cellagglutination
- Komponent i affinitetskolonner
- Separation av glykokonjugat
Anvisningar för användning
Medicago's Lens culinaris lyofiliserade lektin kan rekonstitueras med 2 ml avjoniserat vatten före användning, snurra flaskan försiktigt tills full upplösning. Aggregation tros inträffa i närvaro av höga koncentrationer av 2-merkaptoetanol.
Frakt och lagring
Produkten levereras vid -20°C, men för transport under dagen kan den levereras vid rumstemperatur. Det frystorkade pulvret är stabilt i mer än tre år från tillverkningsdatum vid förvaring under -20°C. Efter rekonstituering med avjoniserat vatten kan lösningen förvaras fryst i fungerande alikvoter i upp till 12 månader.
Referenser
(1) Liener I. E., Sharon N., Goldstein I. J., (1986) The Lectins - Properties, Functions and Applications in Biology and Medicine.
(2) Strukturen hos linsens (Lens culinaris) lektin Aminosyrasekvensbestämning och förutsägelse av sekundärstrukturen. Andre Foriers, Evelyne Lebrun, Roland Van Rapenbusch, Roeland de Neve och A. Donny Strosberg. J. Biol. Chem. 256, nr 11: 5550-5560.
(3) NMR, molekylär modellering och kristallografiska studier av interaktionen mellan linslektin och sackaros. Casset, F., Hamelryck, T., Loris, R
